貨號：10457-1， 包裝：50T，價格：380元
英文名稱：Total RNA Rapid Extraction Kit (Column)
總RNA快速提取試劑盒（柱式）
（適用范圍：細(xì)胞、組織、全血、骨髓、體液、細(xì)菌、病毒）
產(chǎn)品組成：
RA1 | 10ML (僅提取細(xì)胞漿RNA時使用） |
RA2 | 30ML |
Wash Buffer | 9ML(第一次使用前加入51ML無水乙醇） |
洗脫液 | 10ML |
吸附柱（內(nèi)外管） | 50套 |
產(chǎn)品簡介：
Proandy自主研發(fā)的本品，提取時間快（7-10min），步驟最少4步（裂解-吸附-清洗-洗脫）。
獲得的RNA質(zhì)量與RNAzol（Trizol）提取相同，但操作更穩(wěn)定，RNA不易丟失，不同提取批次間變異小，較少發(fā)生DNA和蛋白質(zhì)污染。
獲得的RNA完整性好，純度高（OD260/OD280=1.9-2.1），得率高(>90%)，產(chǎn)量高（1-5ug/ml全血，100-300ug/1x107細(xì)胞，1-6ug/mg組織，50-200ug/1x109細(xì)菌）可以滿足目前所有的后續(xù)試驗要求。
實用性廣，可同時適用于動物組織，細(xì)胞，細(xì)菌，植物組織等的總RNA提取，還可直接處理血清，血漿及其他體液。非常適用于臨床標(biāo)本病毒RNA提取用于RT-PCR檢測。生產(chǎn)全線除RNase處理及防護(hù)，所有容器及試劑除RNase處理。
樣本量：全血（10-1000ul），培養(yǎng)細(xì)胞（﹤1x107），組織（﹤30mg），細(xì)菌（﹤1x109），
體液（尿液，腹水，胸水，腦脊液等）根據(jù)具體細(xì)胞量。
柱容量：200ug total RNA，
洗脫體積：25-50ul，
用途：普通RT-PCR，定量RT-PCR，NASBA，表達(dá)芯片的分析，cDNA合成，構(gòu)建cDNA文庫，RPA，Northern Blot，mRNA篩選等。
操作前悉知注意事項：
1. 試劑盒室溫保存，保質(zhì)期2年。
2. 離心速度均為12,000rpm-14,000rpm，室溫離心（有條件可4℃離心）。以eppendorf 5417離心機(jī)為例，12,000rpm＝13,362g，其它類型離心機(jī)轉(zhuǎn)速應(yīng)達(dá)到相近的g數(shù)。
3. 首次使用時在洗液瓶中加入51ML無污染的分析純無水乙醇，用后擰緊瓶蓋。
4. 避免環(huán)境中RNA酶污染，操作要戴手套，所有槍頭和eppendorf管以DEPC水處理，移液槍保證潔凈無RNA酶污染。如果把試劑放在超凈臺（普通超凈臺或?qū)Ｓ玫淖烂?/span>PCR超凈臺）中操作，可以有效減少RNA酶污染。
5. 血液抽取后應(yīng)在4小時內(nèi)提取RNA。凍存的血液RNA大部分丟失，不能用于提取。如果不能盡快提取，可以先用淋巴細(xì)胞分離液分離獲得細(xì)胞后（包括其它的細(xì)胞、組織），保存在RNA保存液中。
6. 對細(xì)胞量2×106以下，或組織6mg以下，按照上述標(biāo)準(zhǔn)流程操作；對更多量的細(xì)胞和組織，有以下兩種方案：a. 提取細(xì)胞漿RNA（操作流程1d），可以一次處理1×107細(xì)胞、30mg組織（甚至更大量）。由于RNA 90%以上存在于細(xì)胞胞漿中，因而此方法可以提取獲得絕大部分RNA，除有特殊要求提取其它部位RNA的實驗外，一般均可選用此方法；b. 按細(xì)胞量每2×106，或組織每6mg加入RA2液600μl。例如1×107細(xì)胞加入RA2液3000μl，充分顛倒混勻2min，分5次取600μl移入同一內(nèi)套管離心；或者分取600μl同時加入5支內(nèi)套管離心。后續(xù)提取過程按照上述標(biāo)準(zhǔn)流程操作。
7. 有時實驗者發(fā)現(xiàn)樣本中加入RA2液后，出現(xiàn)白色絮狀、絲狀沉淀，這是由于加入RA2液前沒有充分振蕩混勻細(xì)胞懸液或細(xì)胞量過大，將影響RNA的得率。
8. 樣本裂解物加入內(nèi)套管中離心1min結(jié)束后，如管中仍有液體，表明樣本超量或裂解不完全導(dǎo)致吸附膜阻塞。處理方案是：a.減少樣本量；b.加入RA2液后充分震蕩；c.如已發(fā)生阻塞又不想放棄此標(biāo)本，可用加樣槍頭劃破內(nèi)套管膜的表層，再重新離心1min。
9. 盡量保證在膜中央加入洗脫液，低于25μl將不能保證吸附膜被充分浸潤。
10. 洗脫液pH<7.0時會明顯降低RNA的洗脫效率，而國內(nèi)實驗室用水大多呈偏酸性，自備洗脫液時應(yīng)當(dāng)注意。本試劑盒提供的洗脫液為pH7.6。
11. 如果獲得的總RNA出現(xiàn)有明顯的基因組DNA污染，表明操作失誤，如樣本中液體量太多或太少（通常加入100μl），或者RA2液量少于500μl（要求加入500-600μl）。
12. 提取的總RNA置于4℃或冰浴中，立即用于下游實驗（如RT-PCR）；或立即置于-80℃冰箱保存，數(shù)天內(nèi)盡快使用。無論采用何種方法提取和保存的RNA，都往往會被很快降解，因而建議避免提取RNA后保存。
操作流程：
1． 樣本預(yù)處理
a.抗凝全血：離心管中先加入3ml淋巴細(xì)胞分離液，在上層小心加上2-3ml抗凝全血，1,500rpm室溫離心15min，吸取中間層細(xì)胞至1.5ml eppendorf管，加入生理鹽水1ml，4,000rpm離心2min，倒去上清，加入生理鹽水100μl，充分振蕩形成細(xì)胞懸液，直至沒有細(xì)胞團(tuán)塊（重要）；
b.組織塊：剪切成小塊后放入平皿（置冰袋上預(yù)冷）中的鋼網(wǎng)上，加入DEPC處理的PBS或生理鹽水（約1ml/30mg組織），用研磨棒將組織研磨擠壓過鋼網(wǎng)，收集過網(wǎng)懸液，取100μl放入eppendorf管中（也可采用液氮中搗碎或冰浴中勻漿的方法）；
c.培養(yǎng)細(xì)胞：懸浮細(xì)胞離心后留下細(xì)胞團(tuán)塊和適量上清（100μl/2×106細(xì)胞），充分震蕩直至沒有細(xì)胞團(tuán)塊（重要）。取100μl放入eppendorf管中；貼壁細(xì)胞消化后處理同上。
d.采用細(xì)胞漿RNA提取方法時，取上述組織研磨液或各類細(xì)胞懸液離心（2,000rpm×2min），去除上清后充分振蕩致細(xì)胞團(tuán)松散，加入RA1液（100μl/1×107細(xì)胞或30mg組織），充分振蕩混勻30s，再離心30s，吸取100μl上清液放入新的eppendorf管中；
e.體液及其它液體性樣本：尿液、腹水、胸水、腦積液等根據(jù)需要取1-10ml，離心2min，留下沉淀及約100μl上清，充分震蕩懸浮沉淀；有時也可以直接取樣本100μl；
f.細(xì)菌：培養(yǎng)良好的細(xì)菌菌液1ml，離心后留下細(xì)菌團(tuán)塊及大約100μl上清，充分振蕩懸浮細(xì)菌，直至沒有細(xì)胞團(tuán)塊（重要）。
2． 處理好的樣本中，加入RA2液500μl，充分顛倒混勻1min。
3． 將樣本裂解物吸入或倒入內(nèi)套管，離心1min。
4． 棄去外套管中液體，內(nèi)套管中加入500 μl洗液，離心1min。再重復(fù)此過程洗一次。
5． 取出內(nèi)套管，棄去外套管中液體，仍然套回內(nèi)套管，不加洗液，離心1min。
6． 將內(nèi)套管移入新的eppendorf管中，在膜中央加入洗脫液（或pH>7.0的DEPC處理水）25-50μl，室溫靜置1min，離心1min，獲得總RNA。