貨號：10452-1， 包裝：100T，價格：780元
英文名稱：RNAzol+PLG+CFS---套裝
RNAzol(總RNA提取試劑）
產(chǎn)品簡介：
本品RNAzol可以從動物組織、植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細胞等中提取 Total RNA。樣品在 RNAzol 中能夠充分被裂解，在加入氯仿離心后，溶液會形成上清層、中間層和有機層（鮮紅色下層，含有蛋白質(zhì)、 多糖、脂肪酸、細胞碎片和少量 DNA），RNA 分布在上清層中，收集上清層，注意不要收集中間層，經(jīng) 異丙醇沉淀便可以回收得到 Total RNA。使用 RNAzol，Total RNA 的提取過程可在 1 小時內(nèi)完成。 提取的 Total RNA 純度高，很少含蛋白質(zhì)及基因組 DNA，可以直接用于 Northern 雜交、mRNA 純化、 體外翻譯、RT-PCR等各種分子生物學實驗。如果用于 RT-PCR 實驗，即使有少量的基因組 DNA 也會影響實驗結(jié)果，因此，實驗前應使用 DNase I (RNase-free)進行處理。
RNA提取實驗前的準備：
1--氯仿（CHCl3）或氯仿替代物（CFS），異丙醇，75%乙醇（RNase-free），DNase/RNase-Free去離子水。2--盡量使用一次性塑料器皿。使用高溫高壓滅菌后的離心管或用于微量移液器的槍頭。若使用玻璃器皿等，應進行160℃干熱滅菌2h。不能進行干熱滅菌的器皿，需用0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下處理12h，然后在高溫高壓滅菌以除去殘留的DEPC。RNA實驗用的器具建議專門使用，不要用于其他實驗。
3--使用的無菌水須用0.1%的DEPC處理后再進行高溫高壓滅菌。如果使用的試劑不能高溫高壓滅菌，請使用高壓滅菌后的儀器盛裝，無菌過濾后使用。
4--請使用一次性塑料手套和口罩進行所有試劑配置和實驗操作，以避免RNase的污染。
實驗操作：
樣品量 | RNAzol使用量（mL） |
10cm2的貼壁培養(yǎng)細胞 | 1-2 |
5x106-1x107的非貼壁培養(yǎng)細胞 | 1 |
100μL的白細胞 | 2 |
50-100mg的組織樣品（易提取RNA） | 1 |
50-100mg的組織樣品（不易提取RNA，如肝，脾，骨及軟骨等） | 2 |
15-30mg的植物材料（多糖和多酚含量不高的） | 1 |
2-5x107的酵母細胞 | 1 |
1--實驗樣品的研磨和勻漿。
A,貼壁培養(yǎng)細胞---a，倒出培養(yǎng)液，用1xPBS清洗1次。
b，每10cm2生長的培養(yǎng)細胞中加入1-2mL的RNAzol，輕微晃動，確保使裂解液均勻分布于細胞表面。注意：對于貼壁牢固的培養(yǎng)細胞可用細胞刮刀玻璃細胞。
c，將內(nèi)含細胞的裂解液轉(zhuǎn)移至離心管中，用移液槍反復吹吸直至裂解液中無明顯沉淀。
d，室溫（15-30℃）靜置5min，然后從核蛋白中分離RNA.
B,懸浮培養(yǎng)細胞---a，將懸浮培養(yǎng)細胞連同培養(yǎng)液一起倒入離心管中，8,000×g 4℃離心 2 分鐘，棄上清，注意不要破 壞細胞沉淀。
b，向每 5×106 個細胞中加入 1 mL 的 RNAzol。
c，用移液槍反復吹吸直至裂解液中無明顯沉淀。
d，室溫（15-30℃）靜置 5 分鐘，然后從核蛋白中分離 RNA。
C,動物組織，植物材料樣品
a，將超低溫凍結(jié)的RNA提取樣品稱量后迅速轉(zhuǎn)移至用液氮預冷的研缽中，用研杵研磨組織，期間不斷加入液氮，直至研磨成粉末狀（如果沒有研磨徹底會影響RNA的收率和質(zhì)量），可以向研缽中加入與樣品勻漿量匹配的適量的RNAzol 。對于新鮮的組織樣品，立即加入RNAzol，充分勻漿。
b，將勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管中，室溫(15-30℃）靜置5min。
c，12000×g 4℃離心5min。
d，小心吸取上清液，移入新的離心管中（切勿吸取沉淀）。
2-Total RNA的提取
Proandy公司推出了一款獨特的產(chǎn)品—Phase Lock Gel(PLG)，只需將酚氯仿和樣品的混合物加入預裝有PLG的管子里，在離心力的作用下，由于密度不同，在有機相和水相之間形成致密的固相，成為保護核酸免受有機相污染的有效屏障。
注：Phase Lock Gel(PLG) 只適用于和RNAzol搭配做RNA提取，并不適用于常規(guī)組織基因DNA提取。PLG必須保存在室溫，不可冷凍。
a，向勻漿裂解液中加入氯仿或氯仿替代物（CFS）（RNAzol的1/5體積量），蓋緊離心管蓋，混合至溶液乳化呈乳白色。室溫靜置5min。
b，將a步驟中的混合液轉(zhuǎn)移至預裝有PLG的管子里。
c，12000×g 4℃離心15min，從離心機中小心取出離心管，此時勻漿液分為三層，即：無色的上清液（含RNA）,中間的PLG凝膠,下層是帶有顏色的有機相。
d，此時可輕松吸出或倒出全部水相轉(zhuǎn)移至另一新的離心管中。
e，向上清中加入0.5-1倍RNAzol體積的異丙醇，上下顛倒離心管充分混勻后，室溫下靜置10min 。
f，12000×g 4℃離心10min，一般在離心后，試管底部會出現(xiàn)RNA沉淀。
3-RNA沉淀的清洗：
小心棄去上清，切勿觸及沉淀，殘留少量異丙醇沒有關(guān)系，加入與RNAzol等量的75%乙醇，輕輕上下顛倒洗滌離心管管壁，7500×g 4℃離心5min后小心棄去上清，切勿觸及沉淀。
4-RNA的溶解。
打開離心管蓋，室溫干燥沉淀幾分鐘，沉淀干燥后，加入適量的DNase/RNase-Free去離子水溶解沉淀。注意：不可以離心或加熱干燥，否則RNA將會很難溶解。
RNA純度分析
1. 用瓊脂糖凝膠電泳（1%瓊脂糖+溴乙錠）分析按以上方法提取獲得的 1-2 μg 熱變性 total RNA。對于沒有降解的 RNA 可能是 2 種 核糖體 RNA（真核細胞：28S 和 18S），條帶亮度約為 2:1。但如果核糖體 RNA 條帶彌散，可能 RNA 已降解。此外，如果條帶大小超過 28S，可能存在基因組 DNA 污染，建議使用 DNase I 處 理。
2. 吸光度分析：用 TE Buffer 稀釋 RNA 后測定吸光度，OD260/OD280 比值在 1.7-2.1 為好。 例：RNA 濃度計算方法： RNA 濃度（μg/μl）=（OD260-OD320）×稀釋倍數(shù)×0.04
保存溫度：4℃避光保存。