貨號：10438-1， 包裝：50T，價格：480元
貨號：10438-2， 包裝：200T，價格：1800元
英文名稱：Blood Advanced Direct PCR Kit
血液直接PCR試劑盒
【產(chǎn)品概述】
本試劑盒可以直接對血液樣本進行PCR檢測，無需進行DNA純化或樣品預(yù)處理，避免樣本交叉污染問題?？捎糜谥苯訑U增的血樣類型包括：新鮮血液、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲存在Whatman903和FTA商用卡上的干血漬，且兼容所有常規(guī)抗凝劑(EDTA、檸檬酸鹽、肝素等)。本產(chǎn)品使用簡便，可有效擴增高 GC 含量的模板和引物。
【產(chǎn)品組分】
組分 | 規(guī)格 | 儲存溫度 |
2×Blood Direct PCR Mix | 1ml | -20℃ |
RNase-Free ddH2O | 1ml | 常溫 |
【使用方法】
注意：以下舉例僅供參考，實際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異，需根據(jù)實際情況，設(shè)定優(yōu)化反應(yīng)條件。
PCR反應(yīng)體系
以20μl反應(yīng)體系為例
組分 | 推薦用量 | 推薦終濃度 |
2×Blood Direct PCR Mix | 10μl | 1X |
0.5μl | 0.2-0.4μM | |
Reverse Primer (10μM) | 0.5μl | 0.2-0.4μM |
血液模板 | 1μl | |
ddH2O | 補足至20μl |
注：各組分使用前應(yīng)充分混勻。
1. 模板使用量：建議按1-10 %總體系量取用模板，20 μl體系建議采用1 μl血液作為模板；
2. 引物終濃度：0.2-0.4 μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度；
3. 反應(yīng)體系：推薦使用20 μl，也可根據(jù)使用習(xí)慣調(diào)整體系體積大??；
4. 體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應(yīng)液集于管底。
PCR 反應(yīng)條件
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3min | 1 cycle |
變性 | 98℃ | 15sec | |
退火 | 56℃ | 15sec | |
延伸 | 72℃ | 15sec/Kb | |
終延伸 | 72℃ | 5min | 1 cycle |
*退火溫度：請參考引物的理論Tm值，退火溫度可設(shè)置低于引物理論值2-5℃，或通過梯度PCR確定最佳溫度。
【瓊脂糖凝膠電泳】
PCR產(chǎn)物可直接點樣跑瓊脂糖凝膠（不需添加Loading Buffer）。
【對照反應(yīng)】
在PCR結(jié)果分析時，不管是陽性結(jié)果或陰性結(jié)果，如果沒有對照反應(yīng)，都不能確定結(jié)果是否可靠。為了便于后續(xù)實驗結(jié)果的分析，建議在進行PCR時，設(shè)置陽性和陰性PCR對照反應(yīng)以便于排除假陽性或假陰性的干擾。
【注意事項】
1. 過多的血液模板會抑制PCR擴增反應(yīng)，在20 μl反應(yīng)體系中，適宜的模板加入量為1 μl。初次實驗時，建議在1-5 μl范圍內(nèi)設(shè)置梯度模板加入量，以便找到適宜模板用量。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防護性措施進行實驗操作。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！