貨號(hào)：10437-1， 包裝：100T，價(jià)格：500元
貨號(hào)：10437-2， 包裝：500T，價(jià)格：2200元
英文名稱(chēng)：Escherichia coli liquid direct PCR kit
大腸桿菌菌液直接PCR試劑盒
【產(chǎn)品內(nèi)容】
組分 | 規(guī)格 |
2×直擴(kuò)PCR Mix | 1 ml |
RNase-Free ddH2O | 1 ml |
【儲(chǔ)存條件】
該試劑盒置于-20℃條件下可保存12個(gè)月。
【產(chǎn)品概述】
本產(chǎn)品為2×濃度的快速擴(kuò)增PCR預(yù)混液，具有極高的擴(kuò)增速度與穩(wěn)定性。反應(yīng)緩沖液針對(duì)菌落/菌液PCR優(yōu)化，適合大腸桿菌來(lái)源的模板，是PCR鑒定實(shí)驗(yàn)的理想選擇。本產(chǎn)品包含合適濃度的Mg2+、DNA聚合酶和dNTPs，使用時(shí)只需添加模板和引物，并補(bǔ)水至1×濃度即可進(jìn)行反應(yīng)。產(chǎn)品中包含上樣緩沖液，擴(kuò)增產(chǎn)物無(wú)需額外添加Loading Buffer即可直接點(diǎn)樣電泳。
【使用方法】
一、PCR 反應(yīng)體系
組分 | 推薦用量 | 推薦終濃度 |
2×直擴(kuò)PCR Mix | 10 μl | 1× |
0.5 μl | 0.2-0.4 μM | |
Reverse Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.2-0.4 μM |
模板DNA | 1 μl | |
ddH2O | 補(bǔ)足至20 μl |
注：各組分使用前應(yīng)充分混勻。
a.引物終濃度：推薦每條引物使用終濃度為0.4 μM，引物使用量太多會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增增加，使用量過(guò)少則會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增失敗或產(chǎn)量低。
b.模板使用量
菌液：建議取用量為1 μl菌液為模板
菌落：可直接挑取單菌落于反應(yīng)液中，或?qū)⒕淙芙庥?/span>10-20 μl無(wú)菌水中，混勻吸取1 μl為模板
c.反應(yīng)體系：推薦使用20 μl，也可根據(jù)使用習(xí)慣調(diào)整體系體積大小。
d.體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時(shí)離心將反應(yīng)液集于管底。
二、PCR 反應(yīng)條件
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 cycle |
變性 | 98℃ | 15 sec | |
退火 | 56℃ | 15 sec | |
延伸 | 72℃ | 15 sec/Kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 cycle |
*退火溫度：請(qǐng)參考引物的理論Tm值，退火溫度可設(shè)置低于引物理論值2-5 ℃，或通過(guò)梯度PCR確定最佳溫度。
【瓊脂糖凝膠電泳】
PCR產(chǎn)物可直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（無(wú)需加入Loading Buffer）。
【對(duì)照反應(yīng)】
在PCR結(jié)果分析時(shí)，不管是陽(yáng)性結(jié)果或陰性結(jié)果，如果沒(méi)有對(duì)照反應(yīng)，都不能確定結(jié)果是否可靠。為了便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，建議在進(jìn)行PCR時(shí)，設(shè)置陽(yáng)性和陰性PCR對(duì)照反應(yīng)以便于排除假陽(yáng)性或假陰性的干擾。
【注意事項(xiàng)】
1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防護(hù)性措施進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。
2. 本產(chǎn)品僅作科研用途！