貨號：10436-1， 包裝：100T，價(jià)格：480元
貨號：10436-2， 包裝：500T，價(jià)格：1800元
英文名稱：Yeast Sample Direct Expansion PCR Identification Kit
酵母樣品直擴(kuò)PCR試劑盒
【產(chǎn)品概述】
本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液，所得產(chǎn)物不受細(xì)胞釋放PCR抑制劑影響可以直接用于PCR擴(kuò)增，可用于酵母等微生物基因擴(kuò)增分析。
【產(chǎn)品組分】
組分 | PD-001 100 rxns （20 μl/rxn） | 保存條件 |
酵母樣品裂解液 | 10 ml | 常溫 |
2x 直擴(kuò)PCRMix | 1 mL | -20℃ |
【使用方法】
1. 裂解：用槍頭挑取適量樣品（肉眼可見的明顯菌體團(tuán)塊），加入到70 μl裂解液中，95℃孵育30分鐘。
2. 離心：12000 rpm，1 min。
3. 基因擴(kuò)增：取0.5-1 μl上清液用于PCR反應(yīng)（適用于20 μl反應(yīng)體系，其他反應(yīng)體系按比例增加上清液使用量）。
【PCR 反應(yīng)鑒定】
一、PCR 反應(yīng)體系
組分 | 推薦用量 | 推薦終濃度 |
2x 直擴(kuò)PCR Mix | 10μl | 1X |
0.2-0.4μM | ||
Reverse Primer (10μM) | 0.5μl | 0.2-0.4μM |
裂解產(chǎn)物 | 1μl | |
ddH2O | 補(bǔ)足至20μl |
注：各組分使用前應(yīng)充分混勻。
二、PCR 反應(yīng)條件
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3min | 1 cycle |
變性 | 98℃ | 15sec | |
退火 | 56℃ | 15sec | |
延伸 | 72℃ | 15sec/Kb | |
終延伸 | 72℃ | 5min | 1 cycle |
*退火溫度：請參考引物的理論Tm值，退火溫度可設(shè)置低于引物理論值2-5 ℃，或通過梯度PCR確定最佳溫度。
【注意事項(xiàng)】
1. 模板使用量：建議按1-10%總體系量取用模板，20 μl體系建議采用1 μl上清液作為模板。
2. 引物終濃度：0.2-0.4 μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時(shí)，可在0.1-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
3. 反應(yīng)體系：推薦使用20 μl，也可根據(jù)使用習(xí)慣調(diào)整體系體積大小。
4. 體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時(shí)離心將反應(yīng)液集于管底。
【瓊脂糖凝膠電泳】
PCR產(chǎn)物可直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（無需加入Loading Buffer）。
【對照反應(yīng)】
在PCR結(jié)果分析時(shí)，不管是陽性結(jié)果或陰性結(jié)果，如果沒有對照反應(yīng)，都不能確定結(jié)果是否可靠。為了便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，建議在進(jìn)行PCR時(shí)，設(shè)置陽性和陰性PCR對照反應(yīng)以便于排除假陽性或假陰性的干擾。
注意：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用，不能用于人、動物的醫(yī)療或診斷程序，不能使用本產(chǎn)品作為食品、化妝品或家庭用品等。