貨號：10434-1， 包裝：1000U，價格：140元
貨號：10434-2， 包裝：10000U，價格：1100元
英文名稱：Taq DNA Polymerase（無外切酶酶活性）
Taq DNA聚合酶
Taq DNA Polymerase
產(chǎn)品描述 :
Taq DNA Polymerase 是嗜熱性 Thermus aquaticus 表達的熱穩(wěn)定重組型 DNA 聚合酶，分子量為 94 KD。具有 5’→3’ 聚合酶活性和 5’→3’外切酶活性，無 3’→5’外切酶活性。擴增產(chǎn)物具有 3’-dA，可直接用于 TA 克隆。
產(chǎn)品組分：
組分 | 1000U |
10×Taq Buffer (Mg 2+ Free) | 4X1ML |
25 mM MgCl2 | 2X1ML |
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 200ul |
產(chǎn)品應(yīng)用：基因型鑒定，菌落PCR等常規(guī)PCR.
活性定義：用活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物，74℃，30 min 內(nèi)，攝入 10 nmol 的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為 1 個 活性單位（U）。
質(zhì)量控制：
核酸外切酶殘留檢測：10 U 本品和 0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育 4 h，DNA 的電泳譜帶無變化。
切口酶殘留檢測：10 U 本品和 0.5 μg IL23R 質(zhì)粒，37℃下孵育 4 h，DNA 的電泳譜帶無變化。
RNase 殘留檢測：10 U 本品和 0.5 μg 293T 細胞總 RNA，37℃下孵育 1 h，RNA 的電泳譜帶無變化。
溫度保存：-20℃保存，有效期2年。
PCR 反應(yīng)體系（冰上配制）：
組分 體積 （ul） 終濃度 |
ddH2O to 50 - |
10×Taq Buffer (Mg 2+ Free) 5 1× |
25 mM MgCl2 3 1.5 mM |
dNTP Mix (10 mM each) 1 0.2 mM |
模板 DNA optional - |
引物 1(10 μM) 2 0.4 μM |
引物 2(10 μM) 2 0.4 μM |
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) 0.4 0.04 U/μL |
【注】:1）Mg 2+ 終濃度：Mg 2+最佳濃度為 1.5-2 mM，如有需要，可 0.2-0.5 mM 為間隔向上摸索 Mg 2+最佳使用濃度。
2）聚合酶添加：室溫下聚合酶有一定程度的 5’-3’聚合酶活性，為了防止非特異性擴增，建議將聚合酶在最后一步 加到反應(yīng)體系中。
3）聚合酶濃度：推薦使用 0.04 U/μL?？梢栽?0.025-0.04 U/ μL 之間進行優(yōu)化。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL 反應(yīng)體系）：
模板種類 | 擴增片段 |
基因組 DNA | 50 ng-100 ng |
質(zhì)粒 DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL（不超過反應(yīng)體系的 1/10） |
PCR擴增程序：
循環(huán)步驟 | 溫度（oC） | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94 | 30 sec-5 min | 1 |
變性 | 94 | 30 sec |
35 |
退火 | 50-60 | 30 sec | |
延伸 | 72 | 60 sec/kb | |
終延伸 | 72 | 10 min | 1 |
【注】: 1）預(yù)變性溫度和時間：推薦使用 94℃。預(yù)變性推薦時間：質(zhì)粒 DNA 等簡單模板為 30 sec；cDNA、基因組 DNA 等復(fù)雜模板為 3 min；高 GC 含量模板為 5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦使用 60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設(shè) 置為 20 sec，可以在 10-30 sec 內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導(dǎo)致擴增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）擴增產(chǎn)物：請將 PCR 擴增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止 DNA 發(fā)生降解。