貨號(hào)：Y-113-1， 包裝：1ML，價(jià)格：300元
貨號(hào)：Y-113-2， 包裝：5×1ML，價(jià)格：1200元
產(chǎn)品別名：SYBR Green qPCR Master Mix
英文名稱：2×qPCR Mix （SYBR Green）
英文別名：Realtime PCR Kit，RT-PCR Kit
2×qPCR Mix（SYBR Green）
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品是采用SYBR Green I嵌合熒光法進(jìn)行qPCR的專用試劑，可對(duì)目的基因片段進(jìn)行定量檢測(cè)。產(chǎn)品采用了抗體修飾的新型熱啟動(dòng)Taq DNAPolymerase，配合創(chuàng)新優(yōu)化的最適Buffer，可以在所有Real-Time PCR儀平臺(tái)進(jìn)行高特異性、高靈敏度的qPCR檢測(cè)，定量結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好、可信度高。ROX Reference Dye I/II用于校正儀器孔間誤差，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)所用儀器選擇添加。
產(chǎn)品組成
組分 | 100 rxns/20μlreaction | 500 rxns/20μlreaction |
2×qPCR Mix (SYBR Green) | 1.0 mL | 5×1.0 mL |
50×ROXReferenceDye I | 40 μL | 200 μL |
50×ROXReferenceDye II | 40 μL | 200 μL |
實(shí)驗(yàn)流程
1. 在qPCR管中配制如下反應(yīng)體系
2×qPCR Mix (SYBR Green)a | 10.0 μl |
Primer1 (10 μM)b | 0.8 μl |
Primer2 (10 μM)b | 0.8 μl |
Template DNA/cDNAc | x μl |
50× ROX Reference Dye I/IId | 0.4 μl |
ddH2O | Up to 20.0 μl |
a 使用前請(qǐng)確認(rèn)完全溶解，并充分混勻。
b通常反應(yīng)體系中引物終濃度為0.4 μM。當(dāng)反應(yīng)性能較差時(shí)，可以在終濃度0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)調(diào)整優(yōu)化。
c模板加入量因待測(cè)基因拷貝數(shù)差異而不同，可進(jìn)行模板梯度稀釋預(yù)試驗(yàn)得到最佳用量。模板用量建議不超過100 ng。推薦將模板稀釋后加入反應(yīng)體系中，以提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。如模板為未稀釋cDNA原液，加入體積不應(yīng)超過qPCR反應(yīng)總體積的1/10。
d 根據(jù)所使用Real-TimePCR儀機(jī)型確定ROX Reference Dye使用情況，如下所示：
ROX Reference Dye I: Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast; StepOne, StepOnePlus.
ROX Reference Dye II: Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7; Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P.
無需添加ROX Reference Dye: Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler.
2. 按照如下程序進(jìn)行qPCR反應(yīng)
階段 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性a | 95℃ | 30 sec | 1 cycle |
循環(huán)反應(yīng) | 95℃ | 10 sec | 40 cycles 60℃采集熒光信號(hào) |
60℃ | 30 sec | ||
溶解曲線b |
a 該預(yù)變性條件適合絕大多數(shù)擴(kuò)增反應(yīng)；若模板結(jié)構(gòu)復(fù)雜，可延長(zhǎng)時(shí)間至3min以提高預(yù)變性效果。
b 使用儀器默認(rèn)融解曲線采集程序。
保存條件
-25 ~ -15℃避光保存；
2×qPCR Mix解凍后可于2 ~ 8℃避光條件下存放3個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
技術(shù)支持
本公司產(chǎn)品使用過程中如有任何疑問與建議，歡迎隨時(shí)與我們聯(lián)系。