產(chǎn)品名稱(chēng)：染料法熒光定量PCR試劑盒(無(wú)ROX)

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產(chǎn)品別名：SYBR Green qPCR Master Mix

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英文名稱(chēng)：2×qPCR Mix （SYBR Green）

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英文別名：Realtime PCR Kit，RT-PCR Kit

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儲(chǔ)存條件：-20°C

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應(yīng)用:科研

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2×qPCR Mix（SYBR Green）

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本產(chǎn)品是采用SYBR Green I嵌合熒光法進(jìn)行qPCR的專(zhuān)用試劑，可對(duì)目的基因片段進(jìn)行定量檢測(cè)。產(chǎn)品采用了抗體修飾的新型熱啟動(dòng)Taq DNAPolymerase，配合創(chuàng)新優(yōu)化的最適Buffer，能夠進(jìn)行高特異性、高靈敏度的qPCR檢測(cè)，定量結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好、可信度高。本產(chǎn)品不包含ROX Reference Dye，適用于無(wú)需添加ROX的Real-Time PCR儀。

產(chǎn)品組成

組分	100 rxns/20μlreaction	500 rxns/20μlreaction
2×qPCR Mix (SYBR Green)	1.0 mL	5×1.0 mL

實(shí)驗(yàn)流程

1. 在qPCR管中配制如下反應(yīng)體系

2×qPCR Mix (SYBR Green)a	10.0 μl
Primer1 (10 μM)b	0.8 μl
Primer2 (10 μM)b	0.8 μl
Template DNA/cDNAc	x μl
ddH2O	Up to 20.0 μl

 

a 使用前請(qǐng)確認(rèn)完全溶解，并充分混勻。

b通常反應(yīng)體系中引物終濃度為0.4 μM。當(dāng)反應(yīng)性能較差時(shí)，可以在終濃度0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)調(diào)整優(yōu)化。

c模板加入量因待測(cè)基因拷貝數(shù)差異而不同，可進(jìn)行模板梯度稀釋預(yù)試驗(yàn)得到最佳用量。模板用量建議不超過(guò)100 ng。推薦將模板稀釋后加入反應(yīng)體系中，以提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。如模板為未稀釋cDNA原液，加入體積不應(yīng)超過(guò)qPCR反應(yīng)總體積的1/10。

2. 按照如下程序進(jìn)行qPCR反應(yīng)

階段	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性a	95℃	30 sec	1 cycle
循環(huán)反應(yīng)	95℃	10 sec	40 cycles 60℃采集熒光信號(hào)
	60℃	30 sec
溶解曲線b

 

a 該預(yù)變性條件適合絕大多數(shù)擴(kuò)增反應(yīng)；若模板結(jié)構(gòu)復(fù)雜，可延長(zhǎng)時(shí)間至3min以提高預(yù)變性效果。

b 使用儀器默認(rèn)融解曲線采集程序。

 

保存條件

-25 ~ -15℃避光保存；

2×qPCR Mix解凍后可于2 ~ 8℃避光條件下存放3個(gè)月，避免反復(fù)凍融。

 

技術(shù)支持

本公司產(chǎn)品使用過(guò)程中如有任何疑問(wèn)與建議，歡迎隨時(shí)與我們聯(lián)系。